Применение однопробирочного реагента RT при множественной диагностике дыхательных путей
Предисловие
После COVID-19 осведомленность людей о профилактике респираторных инфекционных заболеваний и борьбе с ними постепенно повышалась. На рынке растет спрос на множественное обнаружение распространенных респираторных патогенов, таких как грипп A, грипп B и респираторно-синцитиальный вирус. Масштабный скрининг респираторных заболеваний характеризуется выявлением большого количества и многих видов возбудителей. Однако повторная подготовка реакционной системы в процессе обнаружения может привести к пропуску или неправильному добавлению, что значительно снижает эффективность. Чтобы решить проблему громоздких ПЦР-экспериментов при множественной детекции дыхательных путей и их крупномасштабном скрининге, а также удовлетворить потребности клиентов в высоком удобстве и высокой эффективности, компания Biori выпустила Neoscript Fast RT Premix OT-UNG (Probe qRT- ПЦР),
Особенности продукта
1. Высокая чувствительность: подходит для высокочувствительной амплификации РНК-матриц с низкой концентрацией.
2. Высокая стабильность: предварительное смешивание праймеров и зондов может быть добавлено заранее, а также длительное стабильное хранение при низкой температуре.
3. Совместимость с процедурами быстрой амплификации: используются высокотемпературная обратная транскриптаза и ДНК-полимераза быстрой амплификации, которые имеют более высокую эффективность обратной транскрипции и ПЦР.амплификацию и может завершить реакцию ПЦР в течение 20-40 минут.
Производительность продукта
Сравнительный тест аналогичных продуктов
(1)Нормальная процедура усиления
Условия эксперимента:
Код | M5274 | Система | Четырехкратная система обнаружения респираторных вирусов |
Шаблон | Контроль качества респираторных вирусов шаблон очистки образца | Концентрация шаблона | 0,25,2,5 экз./мл |
Велосипедная программа | 50℃15 мин;95℃1 мин;50 циклов(95℃15 с,56℃45 с) |
Функции | Концентрация шаблона(копий/мл) | Среднее значение Ct | |||
ФАМ | ВИК | РОКС | Cy5 | ||
Поставщик N | 0,25 | 36.50 | 24,97 | 36,93 | 35,95 |
2,50 | 32,83 | 21.21 | 33.02 | 32.33 | |
Биори M5274 | 0,25 | 36,55 | 23.80 | 36,74 | 35,39 |
2,50 | 33.01 | 20.50 | 33,27 | 31,81 |
(2)Процедура быстрой амплификации
Условия эксперимента:
Код | M5274 | Система | Система тройного обнаружения COVID-19 |
Шаблон | COVID-19шаблон очистки образца контроля качества | Концентрация шаблона | 1,25,12,5 копий/мл |
Велосипедная программа | 50℃3 мин;95℃30-е годы;45 циклов(95℃3 с,60℃15 с) |
Функции | Концентрация шаблона(копий/мл) | Среднее значение Ct | ||
ФАМ | ВИК | РОКС | ||
Поставщик N | 1,25 | 35,22 | 35,33 | 34,33 |
12,5 | 32.05 | 31,73 | 31.05 | |
Биори M5274 | 1,25 | 33,86 | 33.18 | 33,53 |
12,5 | 30.25 | 30.03 | 30,53 |
Ускоренный тест стабильности
Условия эксперимента:
Код | M5274 | Система | Четырехкратная система обнаружения респираторных вирусов |
Шаблон | Контроль качества респираторных вирусов шаблон очистки образца | Концентрация шаблона | 0,25,2,5 экз./мл |
Велосипедная программа | 50℃15 мин;95℃1 мин;50 циклов(95℃15 с,56℃45 с) |
Метод испытания: поместите реагент-премикс (5×) без праймера и зонда при 37°C на 14 дней и используйте экспериментальную группу, хранящуюся при -20°C, в качестве контроля для сравнительного тестирования. Результаты показывают, что M5274 может сохранять стабильную производительность после ускорения при 37°C в течение 14 дней.
Одна пробирка с ускоренным тестом Prime & Probe(Биори)
Условия эксперимента:
Код | M5274 | Система | Четырехкратная система обнаружения респираторных вирусов |
Шаблон | Контроль качества респираторных вирусов шаблон очистки образца | Концентрация шаблона | 0,25,2,5 экз./мл |
Велосипедная программа | 50℃15 мин;95℃1 мин;50 циклов(95℃15 с,56℃45 с) |
Метод испытания: Смешайте буфер, фермент,праймер и зонд в качестве рабочего раствора и поместите его при 37°C на 3 дня для ускорения. Моментально приготовленный рабочий раствор той же системы использовали в качестве контроля для проведения сравнительного испытания. Результаты показывают, что M5274 может оставаться стабильным в состоянии праймера и зонда, и в последующих экспериментах требуется только добавить матрицу для достижения высокоэффективной амплификации, а реагенты более удобны в использовании.
Ускоренные результаты эксперимента с реагентом в одной пробирке (с праймерами и зондами):
Одна пробирка с тестом Prime & Probe Accelerate Test(Поставщик N):
Испытание на устойчивость к замораживанию-оттаиванию
Условия эксперимента:
Код | M5274 | Система | Четырехкратная система обнаружения респираторных вирусов |
Шаблон | Контроль качества респираторных вирусов шаблон очистки образца | Концентрация шаблона | 0,25,2,5 экз./мл |
Велосипедная программа | 50℃15 мин;95℃1 мин;50 циклов(95℃15 с,56℃45 с) |
Метод испытания: Заморозить и разморозить реагент-премикс (5×) без праймеров и зондов 5, 10, 15 и 20 раз и использовать экспериментальную группу с 0 раз замораживания-оттаивания в качестве контроля для сравнительного тестирования. Результаты показывают, что M5274 может сохранять стабильные характеристики после 20 циклов замораживания-оттаивания.
Приложения
1. Обнаружение родственных РНК вирусов человека и животных
2. Высокочувствительное обнаружение новой короны, вируса гриппа, многосуставное респираторное обследование и т. д.
3. Приложение POCT
Ссылки на продукты
Наименование товара | Код | Функции |
Neoscript Fast RT Premix OT-UNG (Probe qRT-PCR) | M5274 | однопробирочный реагент RT |
Премикс Robustart OT-UNG (зонд для количественной ПЦР) | М2211 | реагент ДНК на одну пробирку |